Sertifiserte referansematerialer (CRM) kommer med et tilhørende sertifikat som sikrer metrologisk sporbarhet til spesifikk målorganisme, forventet nivå og intervall for angitt usikkerhet.

Viktige punkter i sertifikatet

1. Hvilket materiale dette sertifikatet gjelder for

2. Batch-nummeret på materialet, sjekk at materialet og sertifikatet samstemmer

3. Innhold av mikroorganismer, sporbarhet til stamme

4. Instruks for bruk

5. Utløpsdatoer for hhv. sertifikat og produkt, samt informasjon om dette er endelig sertifikat eller om det vil publiseres et nytt

6. Benevning, cfu/vial eller cfu/g

7. Forventet nivå av de ulike målorganismene (Assigned value)

8. Øvre og nedre toleransegrense (high limit/low limit) 

Eksempel på tillaging av simulert vannprøve:

Ampullen inneholder f. eks 4 000 CFU/vial med P. aeruginosa, dvs. omtrent 400 cfu/ml etter fortynning i 10 ml buffer. Dersom 1 ml av denne tilsettes 1 liter vann, så vil forventet nivå være omtrent 40 cfu dersom 100 ml vannprøve filtreres. Dersom 10 ml vannprøve filtreres vil man oppnå omtrent 4 cfu. Velg selv passende volum fra ampullen for å oppnå ønsket nivå.

Eksempel på tillaging av simulert mat-prøve:

Ampullen inneholder f. eks 2 900 cfu/vial med C. perfringens, dvs. omtrent 290 cfu/ml etter fortynning i 10 ml buffer. Dersom 1 ml støpes inn i TSC agar vil dette resultere i en overgrodd skål på omtrent 290 cfu. 0,1 ml vil gi et forventet nivå på omtrent 29 cfu. Alternativt, 1 ml fra -2 fortynning vil gi det samme forventede nivået på 29 cfu. Velg selv passende volum fra ampullen for å oppnå ønsket nivå.

Eksempel på tillaging av simulert mat-prøve med matriks:

Ampullen inneholder f. eks 25 000 cfu/vial med E. coli, dvs. 2 500 cfu/ml etter fortynning i 10 ml buffer. Vei inn 10 g prøve av valgt matriks i en stomacherpose og tilsett 90 ml fortynningsvæske og 1 ml fra ampullen. Så ut eller støp inn 1 ml fra posen og forventet nivå vil være ca. 25 cfu. Velg selv passende volum fra ampullen for å oppnå ønsket nivå.

Her kan du laste ned gjeldende CRM-sertifikater

Hvordan skal man bruke CRM til kvalitetskontroll av deteksjonstester?

I en deteksjonstest kan man inokulere oppformeringsbuljongen med et ønsket nivå av målorganismen fra CRM. Denne spikede prøven kan deretter følge hele analysemetoden i hvert enkelt trinn; den sjekker samtidig oppformeringsbuljongen og inkubatoren, og ikke bare selektive agarer.

Eksempel

De sertifiserte referansematerialene kommer med et sertifikat, her er eksempel på informasjon som kommer fram om nivået fra et slikt sertifikat:

Mengden angis som cfu/g. Dersom man ønsker å sjekke metoden for Salmonella spp. kan man gå fram slik: Materialet veies nøyaktig (10 gram) og fortynnes. Det er mest vanlig å lage en 1/10 fortynning, men velg fortynningsratio slik at nivået passer for ditt formål. Forventet nivå ut fra dette sertifikatet er 2700 cfu/g med Salmonella spp., med lavt og høyt område mellom 1100 og 4900 cfu/g. Dersom materialet fortynnes 1/10 så vil forventet nivå være 270 cfu/ml med høyt og lavt nivå mellom 110 og 490 cfu/ml. Dersom du poder din kontroll med 100 µl av denne fortynningen så har du podet med omtrent 27 cfu av Salmonella spp. Tilpass nivået etter eget ønske.

Oppsummert: Sjekk sertifikatet for hvor lenge det er gyldig for å være sikker på at de forventede nivåene er riktige og at ikke sertifikatet har gått ut. Sjekk forventet nivå og område. Vurder hvilket nivå som er ønsket og lag en fortynning som passer til dette.

Materialet kan også brukes til å spike en valgt matriks. Dette kan utføres for å verifisere en ny metode eller for å kontrollere eksisterende metode. Alternativt kan det anvendes parallellt med analyse av kundens prøve. Dette er spesielt nyttig dersom prøvematerialet er ukjent for laboratoriet eller der det av en eller annen grunn er usikkerhet hvorvidt målorganismen kan gjenfinnes. Det ene uttaket av kundens prøve analyseres som normalt, den andre tilsettes (spikes med) ønsket nivå av CRM. Analysene utføres i sin helhet parallellt. På denne måten kan man få en forsikring om at målorganismen kan gjenfinnes i dette spesifikke materialet, med de egenskapene og eventuell naturlig flora som materialet har. Ukjente prøvematerialer kan inneholde konkurrerende flora og/eller ukjente inhiberende stoffer.